跟父亲关系破裂的 格温·史黛西 （ 海莉·斯坦菲尔德 配），在对付来自异时空的反派秃鹫 （ 乔玛·塔科内 配）时，遇到“蜘蛛女侠”杰西卡·德鲁 （ 伊萨·雷 配）以及堪称团队领袖的“蜘蛛侠2099”米格尔·欧哈拉（ 奥斯卡·伊萨克 配），得以前往所有蜘蛛侠的大本营。另一边，成了他所在的宇宙唯一蜘蛛侠的迈尔斯·莫拉莱斯 （ 沙梅克·摩尔 配），虽然本领越来越娴熟，但不时对自己的身份、跟父母的关系感到十分迷惘，更因为无法见到同伴而倍感孤独。而格温的意外到来，令迈尔斯欣喜不已，两人却没能阻止反派斑点的逃脱。被带到大本营的迈尔斯，遭到米格尔的敌视，并知道了关于自己身世的大秘密。为了返回所在的宇宙，他不得不跟所有蜘蛛侠大打出手，但事情却朝着意想不到的方向发展 。